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25.(12分)纤维素酶能将纤维素降解为单糖或寡糖,且转化过程绿色、低碳,被认为是纤维素资源化利用的可持续方法。在牛、羊等反刍动物的瘤胃中有能分解纤维素的微生物。某科研团队按照下图所示的流程分离瘤胃中的纤维素分解菌,实验中需要甲、乙两种培养基,并在平板上筛选到有透明降解圈的菌落。多次筛选瘤胃液高效分解纤维索的菌株6蜡石蜡石蜡丙降解圈菌落a闲落b菌落c注:①②③表示相应操作。(1)过程①中甲培养基中除水、无机盐、氮源还应有▲成分,培养基表面加入一层无菌的石蜡主要目的是▲(2)过程②中用适宜浓度NaCI溶液而不用无菌水进行梯度稀释的目的是▲(3)科学家发现分离到的微生物产纤维素酶能力弱,进一步研究发现其体内的M基因抑制了其体内纤维素酶基因表达。某科研团队基于CRISPR//Cas9系统拟对某细菌内的M基因进行敲除,以探究该基因对其体内纤维素酶基因表达的调控效果。CRISPR/Cs9系统是其中一种能敲除特定基因的系统,该系统主要包含Cas9蛋白和由tracrRNA和cRNA形成的SgRNA两部分组成,sgRNA能特异性识别并结合特定的DNA序列,从而引导Cas9蛋白到相应位置剪切DNA。①在设计SgRNA序列时,必须事先测定M基因的▲一,从而设计一段Cas9蛋白能▲得到SgRNA的DNA。在耳的基因sgRNA与目的基因特定碱基序列部分结合,结合区最多含有▲种核苷酸,若要将M基因从目标DNA上剪H切下来,需要设计▲种SgRNA。球Co安白左花与gRN试基互补S②将SgRNA基因和Cas9蛋白基因导入的目的基进行剪切▲一目标细菌,科研人员为提高转化效率,常常用▲处理目标细菌一旦细胞中同时含有SgRNA和Cas9,Cas9就会与sgRNA结合在一起并在SgRNA的带领下,来到能够与SERNA▲的目的基因处,特异性地切割M基因。③将CRISPR/Cs9系统基因重组载体成功转染至目标细菌后,与对照组相比,实验组纤维素酶的表达量如右图所示,由此得出的实验结论是▲,判断依据是▲。实验组对照组目标蛋白参考蛋白东阳市2024年5月高模拟考试·生物第8页(共8页)
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