高三2025年高考临门·名师解密卷一[★]生物X(FJ)答案

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25.（9分）柿子的涩味程度与苯丙烷代谢关键酶基因（PAL）的表达情况有关。为筛选PAL基因调控蛋白，科研人员利用质粒B和质粒H（如图）进行了相关研究。请分析回答下列问题：·融合蛋白限制酶切割位点AD基因启动子AD蛋白亮氨酸潮霉素AD基因转录抗性基因合成基因质粒H2质粒B潮霉素抗性基因（无启动子）LAD基因终止子PAL基因启动子区段甲乙注：潮霉素是一种抗生素，可杀死酵母菌。（1）启动子区段除含有RNA聚合酶识别位点外，还存在调控蛋白结合位点，两者通过影响过程决定基因的表达强度。（2）由于PAL基因启动子序列未知，为扩增PAL基因启动子所在区段，需用限制酶切割基因组DNA后，通过酶将已知序列信息的接头片段连接到PAL基因启动子上游，随后根据接头片段和PAL基因编码区序列设计引I物进行PCR。扩增时使用的耐高温DNA聚合酶能催化脱氧核苷酸连接到引物的__端。（3）利用质粒B构建含PAL启动子的重组质粒并导人亮氨酸缺陷型酵母菌，需用不含_的培养基筛选成功转化的酵母菌Y2。将柿子的不同cDNA片段分别插人质粒H的位点_（填编号1~5），理由是_，从而获得重组质粒H、H·。（4）将重组质粒HH分别导人酵母菌Y，并将其分别接种到含的培养基中培养。若Y能生长，则说明该cDNA表达的蛋白与AD蛋白结合形成了融合蛋白，并与PAL启动子结合，激活基因表达，赋予酵母菌抗性。生物学试题第10页（共10页）